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福建省2015年春防猪蓝耳病血清   抗体检测与分析 [复制链接]

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离线刘文强
 
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只看楼主 倒序阅读 使用道具 楼主  发表于: 2016-05-27
目    录

摘要    2
关键词    2
引言    2
1.材料与方法    2
    1.1.材料与试剂    2
      1.1.1血清样品    2
      1.1.2材料    3
      1.1.3试剂    3
    1.2.方法    3
    1.3.步骤    3
      1.3.1试剂的准备    3
      1.3.2操作步骤    3
2.结果    5
3.讨论    6
4.总结    6
致谢    7
参考文献    8





福建省2015年春防猪蓝耳病血清抗体检测与分析

摘 要:为了解福建省内猪群蓝耳病抗体水平,从而为蓝耳病的防控提供理论依据,笔者对福建省内七地市猪抽查血清样品,采用ELISA 方法进行蓝耳病抗体检测。结果表明: 不同猪蓝耳病抗体水平存在一定差异,相比中、小、散 ,模化猪蓝耳病抗体的阳性率较高、离散度较小,结果提示归模化猪比较规范、科学的 蓝耳病疫苗免疫与猪群蓝耳病免疫效果有着正相关,合理科学的免疫程序应用应 是预防猪蓝耳病的首要手段。
关键词:福建猪蓝耳病;抗体;ELISA检测;分析

引言


猪繁殖与呼吸系统综合征( Porcine reproductive and re-spiratory syndromePRRS) 俗称猪蓝耳病,是由猪生殖和呼吸系统综合征病毒(PRRSV) 引起以母猪发热、厌食和流产、死产、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的一种疾病[1]。我国于1995 年首次在北京郊区猪群发现有该病的流行,近年来该病传播范围日渐广泛,成为危害养猪业的重疫病之一。目前对该病尚无有效的治疗方法,疫苗免疫是其主要防控手段。
本病是一种高度接触性传染病,呈地方流行性。PRRSV只感染猪,各种品种、不同年龄和用途的猪均可感染,但以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感。患病猪和带毒猪是本病的重要传染源。主要传播途径是接触感染、空气传播和精液传播,也可通过胎pan垂直传播。易感猪可经口、鼻腔、肌肉、腹腔、静脉及子宫内接种等多种途径而感染病毒,猪感染病毒后2-4周均可通过接触将病毒传播给其他易感猪。从病猪的鼻腔、粪便及尿中均可检测到病毒。易感猪与带毒猪直接接触或与污染有PRRSV的运输工具、器械接触均可受到感染感染猪的流动也是本病的重要传播方式。
1.材料与方法

1.1.材料与试剂


1.1.1血清样品: 从福建七地市抽检共计采集330份,其中福州市采集 45份,宁德市采集45份,莆田市采集60份,龙岩市采集 45份,三明市采集 45份,南平市采集 45份,泉州市采集 45份。
1.1.2材料:艾本德移液枪、一次性移液吸头、96孔赛默飞洗板机、96孔热电酶标仪、蒸馏水、刻度烧杯、洗液槽
1.1.3试剂:猪蓝耳病抗体检测试剂盒为美国 IDEXX 产品。

1.2.方法


按照猪蓝耳病 ELISA 检测试剂盒使用说明,对被检血清进行检测。结果计算方法见表 1。结果判定方法:PRRS 抗体的阳性 /阴性应通过计算样品与阳性对照(S/P) 的比值进行判定。结果判定标准: PRRS 抗体的有无(阳性/阴性) 通过计算每个样品的阳性/阴性对照(S/P) 的比值进行判定。如S/P 值低于 0.4,检测样品血清应判定为 PRRS抗体阴性。如果 S/P 值大于或等于0.4,检测样品血清应判定为PRRS 抗体阳性。

1.3.步骤


1.3.1试剂的准备
估算洗板所需要的洗涤液的体积。使用前浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水10倍稀释(1份洗液加9 份水,例如:30ml浓缩洗涤液加入270ml蒸馏水)。
在无菌条件下配制(无菌水和无菌容器)的洗液可以在2-8℃条件下保存7天。 样品的准备。
用样品稀释液40倍稀释待检样品(例如:5L样品加195L样品稀释液)。注意:不要稀释对照。 取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在添加到PRRSV包被 板前应混匀。
1.3.2操作步骤
使用前所有试剂应恢复至18-26℃。试剂应轻轻旋转或振荡混合。每个样品使用一个单独的吸头。
取出抗原包被板,在记录表上记录样本的位置。
加入100ml没有稀释的阴性对照,每次检测加两孔。
加入100 ml没有稀释的阳性对照,每次检测加两孔。
在相应的孔中加入100ml已稀释好的样品。
18-26℃条件下孵育30分钟±2分钟
将各孔的液体弃入废液筒。
用大约300 ml洗涤液洗涤板孔,共洗涤3-5次。每次洗涤后应吸去孔内的液体。在两次 洗涤之间和加入酶标抗体之前,应避免包被孔干燥。在最后一次洗涤液吸去后,将孔 中残留的洗涤液在吸水纸上拍干。
每孔加入100 ml酶标抗体。
18-26℃条件下孵育30分钟(±2分钟)。
重复步骤67
每孔加入100 mlTMB底物液。
18-26℃条件下孵育15分钟(±1分钟)。
每孔加入100ml终止液,终止反应。
测量并且记录样本和对照的吸光值A(650)
计算结果。



2.结果



七个地市规模化猪场猪蓝耳病血清抗体检测结果见表2。表2结果显示,此次猪蓝耳病血清抗体检测研究中泉州市、三明市阳性率最高( 100% ) ,南平市、福州市阳性率为( 97.8% ) ,宁德市阳性率为( 91.1% ) ,龙岩阳性率为( 82.2% ),莆田市最差阳性率为( 80.0% )

2  猪蓝耳病血清抗体检测结果
地区
县区
监测数
合格数
合格率%
福州市
永泰县
45
44
97.8%
宁德市
周宁县
45
41
91.1%
莆田市
秀屿区
60
48
80.0%
龙岩市
漳平市
45
37
82.2%
三明市
大田县
45
45
100.0%
南平市
松溪县
45
44
97.8%
泉州市
德化县
45
45
100.0%
合计
330
304
92.1%






3.讨论


检测结果表明,相比福建省规模化程度较小或散养户而言,规模化程度较高的猪场无论是在蓝耳病抗体免疫阳性率还是在抗体离散度方面均优于较小规模猪场,这应该与规模化猪场较合理、科学的免疫程序应用相关。目前,由于PRRS 没有特效治疗措施,从而接种疫苗成为 PRRS 的主要防控手段,而 PRRSV 会损害免疫系统引起并发和继发感染。甚至会导致免疫失败。因此,养猪业应时刻保持对猪蓝耳病的高度警惕,尤其是较小规模的养殖场更应该高度重视蓝耳病的防控工作,适时接种疫苗,建立个性化猪蓝耳病疫苗免疫程序,平时加强免疫效果的监测工作,配合加强日常饲养管理,引种或补栏检疫,生物安全控制,及合理安排消毒工作,是当前猪场防制猪蓝耳病的有效方法。

4.总结


在福建省预防与控制中心进行了10个月的实习,有幸参与了2015年春防检测,对猪蓝耳病有了更进一步的了解。以及疫苗对疫病的预防是很重要的,本次实习让我获益良多,体会到“纸上得来终觉浅,绝知此事要躬行”。
作为一位合格实验员必须细心、耐心且公正的处理着每一个样品,遇到可以样品是必须遵守实验规则重复实验,不应该投机取巧,在岗位上必须记住职业操守,让实验数据尽可能的公正,给送检者以公正、公平。

感 谢


感谢学校给了我这一次实习的机会,感谢福建省动物疫病预防控制中心给我的实习机会,关玉芳、吴波平科长对我在专业上的指导,感谢福建农林大学研究生陈鹏强对论文实验的帮助,感谢论文指导老师对论文的指导。















参考文献

[1] 郭奎,高亚飞,高亚成,孙裴.农技服务[J],规模化猪场猪蓝耳病血清抗体检测与分析2012,29( 12):1326.
[2] 杜元钊,陈溥言.猪繁殖与呼吸综合征的防制[J],中国动物检疫,2007(8):48-50.
[3] 马超锋,孙何云,张轶,赵舒雅,吴晓莲.几种检测猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体ELSIA诊断试剂盒的对比试验[J],猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2013(09).
[4] 陈金雄,纪守学.畜禽生产技术[M].化学工业出版社,2010.10:37-39.
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